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用于培训课程的凝胶电泳技术.Ppt
发布日期:2019-01-28 02:45    浏览次数:     作者:365bet亚洲真人    
银染:银染溶液中的银离子(Ag +)与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛和酸将Ag +还原成银颗粒。当核酸经历电泳时,它可能变成深棕色。
主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶染色。
它的灵敏度是EB的200倍。
然而,在用银染色后,DNA不易恢复。
EB的替代品:GoldView DNA染料是一种新的DNA染料,可以完全相同的方式取代溴化乙锭(EB)。
当使用琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,GoldView与核酸结合,具有与EB相当的灵敏度,并在某些条带中产生强于EB的强荧光信号。
将5毫升GoldView加入100毫升琼脂糖凝胶溶液中或在工作缓冲液中使用相同比例。
双链DNA在紫外光下显示绿色荧光,而单链多核酸链显示红色荧光。
因此,GoldView不仅可以使用双链DNA,还可以用于制造RNA或单链DNA。
GoldView DNA染料在不同波长下具有特定的灵敏度。建议使用312 nm波长。
缺点是它的荧光团很容易在紫外线下消失,并且该带在5-10分钟内消失。
GeneFinder具有安全性和灵敏度方面的优势。溴化乙锭(EB)可以作为某些核酸电泳的染色剂吗?
与高度致癌的EB不同,GeneFinder是一种花青染料,可以安全地用于保护实验者和低毒性的环境。
与双链DNA结合的荧光GeneFinder信号可从800提高到1000倍,和核酸检测的灵敏度比EB染色,这与染料的灵敏度的灵敏度高约10倍。SYBR Green I带分子探针。
GeneFinder染料的最大吸收峰为470nm,与染料结合的核酸发出绿色荧光。
GelRedTM是Biotium在美国开发的优异的红色荧光核酸染色剂。适用于电泳前的凝胶染色和电泳后的凝胶染色。
与其他核酸染色不同,它具有高灵敏度,高稳定性,低毒性和多功能性。
该染料不仅灵敏度高,而且稳定性好,适应性广,可用于预染色电泳和电泳后染色。
使用紫外镜获得最佳激发效果约300nm,红色发射光谱显示在595nm附近。
因此,通过使用通常使用的300nm紫外光谱仪可以获得最佳激发光谱。
与预制的EB凝胶不同,GelRedTM预制凝胶几乎没有背景荧光,对低分子量DNA片段非常敏感。
与EB一样,用GelRed制成的预成型凝胶可以长时间保存而不会降低性能。
SYBRGreen1和SYBRGold斑点没有此属性。
当GelRed?用于凝胶后染色时,它可以在30分钟内完全着色。由于没有背景颜色,因此不需要变色或冲洗过程。
另外,由于GelRed TM具有良好的酸碱水解稳定性,因此可以分批制备以备后用。
GelRed的另一个重要特征是它比EB更安全,但价格昂贵。
第三,凝胶电泳(A)琼脂糖凝胶(琼脂糖凝胶)的种类琼脂糖结合的吡啶基-β-d半乳糖1,3和1,4一起琼脂(琼脂)α糖的分离脱水组合物 - L-半乳糖。
后加热熔化琼脂糖分子随机分布的直链,链之间的糖分子的羟基基团时温度降低会与氢键键合的孔结构。根据琼脂糖的浓度形成不同的孔径。由于琼脂糖凝胶可通过氢键,或超过凝胶的第二熔化,和高氯酸钠(的NaClO 4)通常用于破坏氢键,如过乙酸形成的方法起作用我会的。该原理也用于凝胶回收试剂盒。
随着实验技术的发展,多种类型的琼脂糖凝胶已被用于不同的应用开发了:(1)DNA片段的回收,并且因为在该凝胶没有抑制酶,低熔点琼脂糖凝胶。,可以在凝胶如链接中消化。(2)高熔点凝胶,能够分离小于1kb的DNA片段,专门用于PCR产物的分析。(3)高速凝胶。它的速度是普通凝胶的两倍。它节省了实验时间。(4)其他类型:每个制造商也可以根据实验要求选择不同的种类,选择的原则是考虑机械强度和适当的熔点。
(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)应用于低分子量蛋白质,小于1kb的DNA片段,以及DNA序列分析。
加载的样品量很大,回收的DNA的纯度很高。
长度相差0。
可以分离2%的核苷酸分子(即500bp中的1bp)。
非变性聚丙烯酰胺凝胶:当在中性聚丙烯酰胺凝胶电泳不含有变性剂,单链DNA的迁移率与DNA链的长度相关联,并且取决于,更重要的是。单链DNA链构成的构象|文献信息| J-GLOBAL科技综合链接中心
非变性条件